小鼠胚胎干細胞
貨號 KL-016
簡稱 E14
細胞數 1×106
規格 1ml/T25
價格 詢價
小鼠胚胎干細胞注意事項：
1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。
詳細描述 Description
細胞特性
1）來源：小鼠，胚胎內細胞團
2）形態：球形克隆
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
細胞接受后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養基，添加6ml本公司附帶的完全培養基。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5）接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
細胞用途：僅供科研使用。
小鼠胚胎干細胞
本公司的細胞培養操作規程，供參考
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）mES完全培養液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ，ES級FBS (biochrom S4115) 90 ml， Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml ，NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml ，LIF (Millipore ESG1107) 60μl（終濃度為1000U/ml），β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。**天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：小鼠胚胎干細胞如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，小鼠胚胎干細胞迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養基的T-25培養瓶中或含有14ml培養基的T-75培養瓶中培養。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，*后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
