一、Easysep? 產品是如何工作的？ 

Q：Easysep?產品能夠用于正選或者是負選實驗嗎？

A：是的。Easysep?試劑盒能夠用于去除不需要的細胞的負選或者是富集想要的細胞的正選方法。**試劑盒是能夠用于移除特定標記的細胞（比如：GlyA）。

Q：Easysep?分選的原理是什么？

A: 使用抗體復合物和葡聚糖包被的納米磁珠可在短時間內分選細胞。四聚體抗體復合物（ Tetrameric  Antibody  Complexes， TAC )可將目標細胞和磁珠聯結起來。當樣本置于EasySep?磁極內時，標記的細胞會被吸附到試管壁上。被磁珠標記的細胞（正選組分）仍將保留在試管中，而未經標記的細胞（負選組分）則被倒入新的試管中。

Q：我需要使用哪一種規格的分離柱？

A:  EasySep? 產品不需要使用分選柱子。快捷的無柱分選！

Q: 如何分析收集到的樣本細胞的純度？

A: 每個EasySep?試劑盒里都提供了詳細的產品說明書，并且包括了詳細的流式分析的純度檢測結果。

Q：EasySep?分選是否能夠自動化？

A: 是的。RoboSep?系列是能夠完全實現細胞的自動化分選，自動進行EasySep?細胞標記以及分選的全過程。

Q: 樣本初始細胞較少時能夠使用EasySep?進行分選嗎？

A: 可以，我們推薦使用細胞濃度2X108 cells/ml，*小體積為100 ul。即100 ul溶液中包含2X107個細胞。

二、EASYSEP? 磁珠相關

Q: EasySep?磁珠與流式儀器是否兼容？

A: EasySep?磁珠能夠與流式儀器兼容，因為EasySep?磁珠的大小是納米級別的，約比正常的商業用途上用于無柱分選系統中的磁珠還小5000倍。

Q: 使用EasySep?磁珠用于富集細胞時，是否能夠將磁珠與細胞進行解離？

A: 不需要進行解離，因為EasySep?的磁珠是很小的，它并不影響細胞下游的應用。

Q: EasySep?磁珠結合影響細胞嗎？正選的細胞結合磁珠是否會有功能學的影響？

A: 已經有大量的文獻報道，使用EasySep?正選的試劑盒分離的細胞能夠用于功能學的研究（細胞培養等）。我們也經過驗證正選后與EasySep?的磁珠結合的細胞并不影響細胞的功能的改變。

如果擔心細胞結合磁珠會影響實驗結果，我們建議可以使用負選的方法進行細胞的分選。EasySep?磁珠負選的方法能夠分選出純度較高的未結合磁珠的細胞，或者使用RosstteSepTM能夠從全血中分離未結合的細胞，而不涉及到磁珠問題。

三、EASYSEP? 實驗過程是可以改變的嗎？

Q: 我能夠改變細胞在磁極中吸附的時間嗎？

A:可以的。但是，這樣很有可能會影響試劑盒分選的*佳結果。試劑盒里提供的操作步驟是已經優化的*佳條件，可以保證分離后細胞的純度、得率以及完成實驗時所需的*短的時間。

Q：正選的時候，可以進行3次的磁珠吸附的過程嗎 ？

A: 可以的，進行多次的磁珠吸附可以提高細胞的純度，但是有可能會導致細胞的得率降低。

四、RosetteSep^TM 產品是如何工作的？ 

Q: 什么是RosetteSep??

A: RosetteSep?是可以直接從人全血中快速分離純化的細胞，而不需要特定的分離柱和磁極。

Q：ROSETTESEP?分離的原理是什么？

A：從全血中分離**細胞，只需使用適當的RosetteSep?抗體混合物與樣品孵育，然后使用SepMate?或標準密度梯度離心進行分離。RosetteSep?將不需要的細胞與紅血細胞交聯，形成**玫瑰花結結構，在離心過程中，這些**玫瑰花結會被離心到管底而被除去（圖1）。

圖1. 加入RosetteSep?抗體混合物后，進行密度梯度離心前的血液樣本圖例

在血漿和密度梯度離心液之間的界面中留下高純度的目的細胞。如果使用SepMate?，只需將純化的細胞倒入新的試管即可。若用密度梯度分離液，需要從血漿和密度梯度離心液的界面收獲目的細胞。

Q：細胞收集的影響因素是什么？

A: 所使用的實驗材料的溫度會影響細胞的收集。所有的使用材料在進行分離前都必須平衡至室溫（包括樣本，密度離心介質，PBS，離心機等）。分離層也會影響細胞的收集，要小心地將樣本鋪在密度離心介質上層，盡量不要打破分離層。確定收集到的細胞沒有包含紅細胞，若收集到少量的密度離心介質是沒有關系的。

Q：哪些細胞樣本可以用于RosetteSep?？

A: RosetteSep?可以用于人白細胞去除、骨髓或者是白膜層的收集，細胞的密度不要超過5X107 cells/ml(必要的話可以進行稀釋)；有核的細胞與紅細胞的比率約為1:20，所以必要的時候可以先對紅細胞進行裂解。

Q: RosetteSep?是否可以用于凍存的細胞或者培養的細胞分離？

A:可以的。細胞可以用包含2%FBS的PBS重懸，細胞的密度為2-5x107 cells/ml。

Q: RosetteSep?是否可以用于凍存過的全血的細胞分離？

A：可以的，有時候凍存過的全血包含著未成熟的有核的紅細胞，這種細胞比成熟的紅細胞具有更低的密度，但是未成熟的紅細胞并不會通過Ficoll?而分離，從而導致更高的RBC污染，相比外周血分選。

Q: RosetteSep?是否可以用于小鼠細胞的分離？

A： 不可以，但是我們有其他的產品如EasySep?系列，基于磁珠連接細胞的原理的產品能夠用于小鼠或者是其他非人源細胞的分離。

五、樣本的抗凝處理相關

Q: RosetteSep?需要使用什么抗凝劑？

A: 人的外周血必須使用肝素化的抗凝管進行收集；凍存的血液必須使用ACD。

Q：使用RosetteSep?前需要將抗凝劑清洗掉嗎？

A:不需要，抗體的混合物可以直接加入到樣本細胞溶液中。